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構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pBV220／mhNT-4及mhNT-4在大腸桿菌中的表達(dá)
畢業(yè)論文
| 全部作者： | 張華 趙家良 胡海濤 |
| 第1作者單位： | 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)院眼科 |
| 論文摘要： | 利用基因重組技術(shù)將mhNT-4亞克隆到表達(dá)載體pBV220，構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pBV220／mhNT-4，誘導(dǎo)表達(dá)mhNT-4成熟蛋白，鑒定mhNT-4的生物活性。將經(jīng)鑒定的pGEM-T Easy /mhNT-4克隆用限制性內(nèi)切酶EcoR I,BamH I消化，瓊脂糖凝膠電泳回收片斷。酶切原核高表達(dá)載體pBV220，用限制性內(nèi)切酶EcoR I,BamH I消化，瓊脂糖凝膠電泳回收線性化載體。用T4 DNA連接酶連結(jié)兩個回收片斷，構(gòu)建重組質(zhì)粒pBV220／mhNT-4。限制性內(nèi)切酶消化，瓊脂糖凝膠電泳鑒定重組質(zhì)粒。經(jīng)鑒定的重組質(zhì)粒pBV220／mhNT-4轉(zhuǎn)染大腸桿菌DH5α，溫度誘導(dǎo)表達(dá)mhNT-4蛋白。SDS-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)凝膠電泳技術(shù)分離表達(dá)的mhNT-4蛋白。制備8~9d雞胚，分離并培養(yǎng)背根神經(jīng)節(jié)(DRG)細(xì)胞。分別加入回收的表達(dá)蛋白和牛血清白蛋白，培養(yǎng)雞胚背根神經(jīng)節(jié)DRG細(xì)胞，檢測mhNT-4生物活性。重組表達(dá)質(zhì)粒pBV220／mhNT-4構(gòu)建正確，表達(dá)框架未發(fā)生改變。成功誘導(dǎo)表達(dá)、分離了mhNT-4成熟蛋白。表達(dá)蛋白組可見大量神經(jīng)突起自神經(jīng)節(jié)組織快周緣向4周呈放射狀長出，對照組未見神經(jīng)突起長出。mhNT-4成熟蛋白具有良好的生物活性。本研究為進1步開展mhNT-4基因治療青光眼提供了資料。 |
| 關(guān)鍵詞： | 人神經(jīng)營養(yǎng)素-4成熟蛋白基因（mhNT-4）；基因重組；表達(dá)載體；生物活性 遠(yuǎn)程下載 論文(免費PDF論文全文) |
| 發(fā)表日期： | 2006年10月23日 |
| 同行評議： | （暫時沒有） |
| 綜合評價： | （暫時沒有） |
| 修改稿： |
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